Окраска мазков и толстых капель крови азур-эозином по Романовскому-Гимза
Необходимо помнить, что хорошие результаты окраски мазков и толстых капель получаются в том случае, когда соблюдаются следующие необходимые условия: а) вода, употребляемая для разведения краски, вполне пригодна для этих целей (реакция, чистота), б) краска хорошего качества, в) стекла, на которых приготовлены мазки или толстые капли, хорошо вымыты, г) мазки и толстые капли недавно приготовлены и хорошо сделаны.
В некоторых случаях, когда желаемая окраска все же не получается, можно к раствору краски Романовского добавить щелочной метиленовой синьки (на 100 мл 10 капель).
Иногда в продажу поступает сухая краска Романовского в виде порошка или таблеток. Для того чтобы приготовить из такой краски рабочий раствор, поступают следующим образом: 3,8 г сухой краски растирают в фарфоровой ступке до полного измельчения (тонкий порошок), затем туда же добавляют небольшое количество 96° этилового спирта и глицерина (поровну) и продолжают растирать. Затем добавляют спирта и глицерина до 500 мл (по 250 мл). Спирт и глицерин должны быть химически чистыми. Краска растворяется медленно в течение нескольких дней. Для ускорения растворения флакон с краской можно поместить в термостат на сутки при
37-60°. После того, как краска растворилась, она может быть использована как обычный продажный раствор указанной краски.
В некоторых случаях при необходимости быстро окрасить препараты по Романовскому можно поступить следующим образом. В раствор краски Романовского (продажный или приготовленный из сухого порошка) добавляют равное количество чистого метилового спирта. Полученную смесь наливают на нефиксированный мазок крови. Срок окраски - около 1 минуты. Затем на мазок, не сливая краски, наливают дистиллированной воды, покачивая стекло (или подставку) и добиваясь перемешивания жидкостей. После этого окраска продолжается еще 5-10 минут. Краску смывают, мазок высушивают и исследует обычным способом.
Окраска азур-эозином по Романовскому гистологических срезов и мазков фиксированным влажным способом
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
В состав красителя входит метанол - яд, класс опасности III, особенности действия на организм А, токсичен при ингаляции, контакте с кожными покровами и особенно при проглатывании. Огнеопасен. Концентрация паров метанола в производственных помещениях при использовании и испытании красителя не должна превышать ПДК = 5 мг/м 3. Работа с красителем должна проводиться в вытяжном шкафу при хорошо действующей вентиляции, в перчатках, вдали от открытого огня.
Меры предосторожности - соблюдение “Правил устройства, техники безопасности, производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной гигиены при работе в лабораториях (отделениях, отделах) санитарно-эпидемиологических учреждений системы Министерства здравоохранения СССР”, Москва, 1981 г.
При работе с красителем следует надевать одноразовые резиновые или пластиковые перчатки, так как образцы крови человека следует рассматривать как потенциально инфицированные, способные длительное время сохранять и передавать ВИЧ, вирус гепатита В или любой другой возбудитель вирусной инфекции.
Химическая посуда и оборудование, используемые при работе с красителем, должны быть соответствующим образом маркированы и храниться отдельно. Запрещаются хранение и прием пищи и курение в помещениях, предназначенных для работы с красителем.
ОБОРУДОВАНИЕ, МАТЕРИАЛЫ, РЕАКТИВЫ
- секундомер
- микроскоп
- цилиндры мерные вместимостью 25 - 1000 мл
Азур-эозин по Романовскому для анализа (чистый)
Назначение
Раствор Азур-эозина по Романовскому используется для того, чтобы окрашивать форменные элементы крови.
Рабочие красящие соединения желательно применять с рН=6,4-6,8. Азур-эозин следует развести в дистиллированной, свежей воде в 10-20 раз для изготовления 0,76% рабочей красящей смеси. До того, как прибавить краситель из расчета 0,05-0,1/100мл рабочего раствора, буфер необходимо вводить в воду.
Рабочий раствор красителя следует наносить на высушенные и фиксированные мазки крови, затем выдержать от 30 минут до 1-ого часа. Препараты промываются дистиллированной водой, высушиваются, затем их можно микроскопировать. Нельзя допускать длительный контакт препарата с водой. Для промывания препарата можно применять водопроводную воду, но эритроциты поменяют цвет на серо-синий. Это происходит из-за щелочной реакции.
В состав красителя входит метанол. Он огнеопасен, токсичен и вреден при вдыхании, приеме внутрь, контакте со слизистыми оболочками или кожей. Работать с красителем следует лишь в вентилируемых помещениях, используя при этом средства защиты (перчатки). Если вы приняли внутрь, то вероятно он вызовет рвоту. При таком случае необходимо выпить 2 литра воды, затем обязательно обратиться к врачу. При попадании красителя в глаза или на кожу, нужно незамедлительно смыть.
Краситель нужно предохранять от негативного воздействия щелочей и кислот. Хранить в помещении, где температура составляет 0-25оС.
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
В состав красителя входит метанол - яд, класс опасности III, особенности действия на организм А, токсичен при ингаляции, контакте с кожными покровами и особенно при проглатывании. Огнеопасен. Концентрация паров метанола в производственных помещениях при использовании и испытании красителя не должна превышать ПДК = 5 мг/м 3. Работа с красителем должна проводиться в вытяжном шкафу при хорошо действующей вентиляции, в перчатках, вдали от открытого огня.
Меры предосторожности - соблюдение “Правил устройства, техники безопасности, производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной гигиены при работе в лабораториях (отделениях, отделах) санитарно-эпидемиологических учреждений системы Министерства здравоохранения СССР”, Москва, 1981 г.
При работе с красителем следует надевать одноразовые резиновые или пластиковые перчатки, так как образцы крови человека следует рассматривать как потенциально инфицированные, способные длительное время сохранять и передавать ВИЧ, вирус гепатита В или любой другой возбудитель вирусной инфекции.
Химическая посуда и оборудование, используемые при работе с красителем, должны быть соответствующим образом маркированы и храниться отдельно. Запрещаются хранение и прием пищи и курение в помещениях, предназначенных для работы с красителем.
ОБОРУДОВАНИЕ, МАТЕРИАЛЫ, РЕАКТИВЫ
- секундомер
- микроскоп
- цилиндры мерные вместимостью 25 - 1000 мл
ПРИГОТОВЛЕНИЕ БУФЕРНОГО РАСТВОРА.
Для приготовления буферного раствора с рН 6,8 – 7,2 рекомендуется буферную смесь (производства НПФ «Абрис+») развести в 3 л дистиллированной воды. Полученный раствор использовать для разведения красителя и промывки стекол.
ПРИГОТОВЛЕНИЕ МАЗКОВ КРОВИ
Мазки крови сделать на предметных стеклах с помощью более узкого предметного шлифованного стекла следующим образом.
Взять предметное стекло за длинные края и прикоснуться его поверхностью, отступив на 0,5 - 1 см от узкого края, к капле крови (но не к коже). Предметное стекло следует держать на столе или в левой руке за края. Правой рукой приставить шлифованное стекло узким краем к предметному стеклу с кровью слева от капли под углом 45° и продвинуть его вправо до соприкосновения с каплей крови. Выждать до тех пор, пока кровь расплывется по всему ребру шлифованного стекла, и затем легким быстрым движением провести его справа налево до тех пор, пока не будет исчерпана вся капля. Капля крови должна быть небольшой и соразмерна так, чтобы весь мазок помещался на предметном стекле, не доходя 1 - 1,5 см до его края. Сильно нажимать на стекло нельзя, так как многие клетки крови могут оказаться поврежденными. Хорошо сделанный мазок тонок, имеет желтоватый цвет и оканчивается “метелочкой”.
После приготовления мазки следует быстро высушить на воздухе до исчезновения влажного блеска; при медленном высыхании может изменяться морфология клеток.
ПРОВЕДЕНИЕ ОПРЕДЕЛЕНИЯ
Мазки необходимо зафиксировать фиксатором-красителем по Май-Грюнвальду или типа Лейшмана в течение 2 мин. Непосредственно перед окраской приготовить рабочий раствор: смешать краситель с буферным раствором в соотношении 1:10 - 1:12 и профильтровать. Полученный рабочий раствор красителя можно использовать в течение 6 часов.
Зафиксированные мазки крови поместить в рабочий раствор красителя, по истечении 10-12 мин препараты промыть проточной водой 1-2 сек, высушить на воздухе и микроскопировать.
Окраска форменных элементов крови должна быть следующей: эритроциты - розовые, розовые с серым или бежевым оттенком, бежево-коричневые; тромбоциты - розово-фиолетовые или фиолетовые; ядра лимфоцитов, моноцитов и нейтрофилов - фиолетовые; цитоплазма лимфоцитов - голубая, серо-голубая или сине-голубая; цитоплазма моноцитов - серо-голубая; цитоплазма нейтрофилов - бледно-розовая или розово-серая; зернистость нейтрофилов - фиолетовая или красно-фиолетовая; зернистость эозинофилов - оранжево-красная, розово-красная или розово-фиолетовая; зернистость базофилов - фиолетовая.
УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ
Хранение красителя должно проводиться при температуре от 0°С до +25°С в крытых вентилируемых помещениях вдали от кислот и щелочей, не допуская воздействия прямых солнечных лучей, в течение всего срока годности (1 год). Краситель стабилен после вскрытия флакона в течение всего срока годности при условии достаточной герметизации флакона.
Для получения надежных результатов необходимо строгое соблюдение инструкции по применению красителя.
style="display:inline-block;width:300px;height:250px"
data-ad-client="ca-pub-6667286237319125"
data-ad-slot="5736897066">
Комментариев нет:
Отправить комментарий